طراحی روشی نوین بر پایه پپتید های تراوا کننده غشا جهت افزایش بازدهی انتقال DNA خارجی به باکتری اشرشیاکولی

سابقه و هدف: انتقال DNA خارجی با بازدهی بالا به داخل باکتری از مهمترین مراحل در زیست فناوری میکروبی می‌باشد. برای این منظور چند روش مرسوم است که در بین آن‌ها روش کلسیم کلراید سرد از جمله مهمترین و ارزان‌ترین روش‌ها جهت انتقال DNA به درون سلول‌های باکتریایی گرم منفی مانند Escherichia coli می‌باشد. به طور معمول بازدهی انتقال DNA در این روش107- 105 کلونی برای یک میکروگرم از DNA خارجی می‌باشد. با توجه به اهمیت فرایند انتقال DNA، تلاش‌های بسیاری به منظور بهینه‌سازی روش‌های مرسوم همچون کلرید کلسیم صورت گرفته است. در این مطالعه نشان دادیم با استفاده از یک پپتید کاتیونیک تراوا کننده غشاء (CM11) و بر پایه روش استاندارد کلرید کلسیم، می‌توان DNA خارجی را با بازدهی بالاتری به درون باکتری E.coli انتقال داد. مواد و روش ها: سلول‌های باکتریایی توسط غلظت‌های متفاوت پپتید ( 5/0، 1 ،2 ،3 و 6 میکرو‌گرم در میلی‌لیتر) و به دو روش متفاوت و بر پایه مستعدسازی توسط کلرید کلسیم، تیمار شدند. سپس پلاسمیدهای pET-28a(+), pGEX4T-1 وpUC19 به عنوان مدل و به صورت جداگانه به درون باکتری مستعد شده منتقل گردیدند. یافته ها: نتایج نشان داد که بالاترین بازدهی انتقال پلاسمید برای باکتری‌های مستعد شده در حضور غلظت 1 میکروگرم در میلی‌لیتر پپتید بدست می‌آید. در این غلظت افزایش انتقال برای پلاسمیدهای pET-28a(+), pGEX4T-1 وpUC19 به ترتیب 4/4، 7/4 و 4 برابر نمونه کنترل بود.  نتیجه‌گیری: این مطالعه نشان داد که پپتید CM11 به عنوان یک پپتید تراوا کننده غشاء سلول می‌تواند باعث افزایش کارامدی انتقال DNA به درون باکتری E. coli با استفاده از مستعدسازی به روش شیمیایی کلرید کلسیم گردد.